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技术资料 操作流程/疑难解答

Q:恺佧生物能够提供怎样的CRO蛋白定制服务?

A:

目前重组蛋白市场客户经常遇到的困扰包括:缺少跨膜蛋白的可溶性抗原;抗原不能引起有效的免疫反应;得不到亲和力高的抗体;购买的重组蛋白 ELISA 结果显示活性正常,但在细胞功能实验上显示活性低或无活性;蛋白的批次间稳定性差,无法用于抗体药批次放行;蛋白表达服务项目方法单一,成功率低,时间长等问题。针对这些难题,恺佧生物的SAMSTM平台全称为Structure Aided design and Multiplex Screening,是恺佧生物独有的创新型功能重组蛋白生产平台。主要是通过生物信息学和计算机模拟蛋白结构的方法,针对客户的具体应用对每个蛋白进行设计,针对相同蛋白同时进行多个构建,通过独创的蛋白表达筛选方法,在最短的时间内获得表达量最优的克隆,在节约了时间的同时,极大的提高了成功率和产率。

Q:蛋白产品进行测定时活性不好,原因是什么?

A:

活性是一个相对的概念,由于其天然构象的限制,抗原抗体两者之间的活性是一个固定的值;不同的抗原抗体天然构象不一样,所以其活性也是不一样的固定数值,可能是0.1nM,10nM或者1uM。蛋白产品进行测定时活性不好的原因可能是多样性的,由于生物学检测方法通常是间接的,未经过充分验证的方法进行测定可能会引起偏差;蛋白活性“不好“也可能和亲和力有关,亲和力较弱的抗原抗体相对于亲和力较强的抗原抗体(100nM v.s. 0.1nM)在同样的剂量条件下有较弱的信号值,此“不好“为蛋白抗原的正常表现,恺佧生物提供的目录蛋白均经过验证的方法进行活性测定,匹配文献报道记载的亲和力数值;重组表达出来的靶点蛋白和其在膜上的天然3D构象存在差异,很有可能出现ELISA蛋白水平有活性,细胞水平没有活性或者经细胞免疫得到的阳性抗体在重组蛋白水平没有活性的情况,这种情况很有可能是因为虽然重组蛋白虽然有正确的氨基酸序列二级结构,但是没有正确的三级结构折叠导致的,恺佧生物基于蛋白结构进行生物信息学分析和蛋白设计,维持重组蛋白的正确三维构象,得到和靶点在细胞膜表面相当活性的重组蛋白,恺佧生物提供的完整活性的CD20跨膜蛋白就是典型的案例。

Q:恺佧生物的蛋白产品的应用范围有哪些?

A:

恺佧生物(Kactus Biosystems)是一家创新型蛋白工具研发和服务技术公司,聚焦于全球创新药研发企业客户,提供基于结构设计的功能靶点蛋白特别是膜蛋白类CRO服务和目录产品。靶点蛋白产品可应用于从药物发现到临床研究的各个阶段,靶点蛋白的具体应用包括动物(小鼠,羊驼,兔等)免疫,噬菌体展示淘选筛选,ELISA亲和力测定,流式阻断测定,CART阳性率检测,临床前/临床实验中PK/PD血样中大分子的定量检测,工艺开发中样品的活性和长期稳定性测定等各个流程。